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    赤芍与白芍的化学成分含量比较研究

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    点击次数:882 更新时间:2016年11月15日11:17:26 打印此页 关闭

    未加工的栽培芍药根中芍药苷含量小于 - 0 , 未检测到 ! / 儿茶素。在同
    样条件下, 加工后的栽培芍药根 (白芍) 中芍药苷含量下降了 2 % 0"1 - 0 , 仍未检测到 ! / 儿茶素, 苯甲酸的变化最大, 下降达
    & 2 0" 3 " 0 。 # 内蒙古多伦赤芍与大、 小兴安岭所产赤芍在化学成分的种类和含量上存在差异。 $ 不同产地、 特别是道地与
    非道地的白芍药材之间, 化学成分的比例有所不同。结论 运用 ’ ( ) * 技术, 可以快速准确地对野生与栽培芍药根的活性成
    分差异进行定量分析。从而为区别同为芍药来源的赤芍和白芍的临床应用提供实验依据。
    关键词: 芍药; 赤芍; 白芍; 高效毛细管电泳法
    一般认为, 芍药野生
    品的根直接干燥就是赤芍, 而栽培品的根去皮水煮后即为白


    。赤芍传统道地产区为内蒙古多伦县附近; 白芍主产
    于浙江, 安徽等地
    [ 2 " . ]
    。以往采用的芍药苷含量测定标准,
    不仅对栽培和野生芍药根难以区分, 而且难以对道地与非道
    地的赤、 白芍质量加以控制
    [ 1 ]
    。已有国内外学者运用高效毛
    细管电泳 ( ’ ( ) * ) 技术探讨了药材或成药中芍药苷等成分的
    测定 方 法
    [ - " 3 ]
    。本 研 究 采 用 ’ ( ) * 的 胶 束 电 动 色 谱
    ( + * , ) ) 分离模式, 同时测定了 ! - 个产区的赤芍和白芍样
    品中芍药苷、 没食子酸、
    ! / 儿茶精 (赤芍精) 、 苯甲酸等多种活
    性成分, 通过分析比较, 进一步明确同一物种来源的赤、 白芍
    药材之间, 不同产地赤芍或不同产地白芍之间的成分差异,
    进而为完善赤、 白芍质量控制标准提供科学依据。
    ·

    !
    仪器与试药
    仪器:
    ! "
    # $
    % & 高效毛细管电泳仪 (美国安捷伦公司) , 配
    有二极管阵列检测器。熔融石英毛细管,
    ’ ( ! ) ( * $ ) , # + ’
    ! )
    ( , $ ) , 总长度 ’ ’- ) , 有效长度 . / 0 ’- ) (河北永年光导纤
    维厂) 。
    试剂和材料: 芍药苷对照品、 没食子酸对照品 (中国药品
    生物制品检定所) , 苯甲酸对照品 (北京化学试剂公司) ,
    ! 1 儿
    茶精对照品 ( 2 3 4 ) 5 公司) 。硼酸、 氢氧化钠、 甲醇 (北京化工
    厂) , 十二烷基硫酸钠 ( 6 7 8 9 5 公司) 。实验中配制缓冲液和样
    品溶液所用的水为 : 次去离子水。实验样品经中国中医研
    究院胡世林研究员鉴定为芍药 ( " # $ % & ’ # ( # ) * ’ + ( % , # " 5 7 7 0 ) 的野
    生品或栽培品的干燥根, 全部直接采自原产地。
    "
    方 法
    " 0 !
    电泳条件
    " 0 ! 0 !
    背景缓冲液
    # () ) ; 7
    · < = > 2 $ 2 1 # () ) ; 7 · < = > 硼酸 1
    > ’ ? 甲醇, 用浓 @ 5 , ! 调
    A !
    至 > ( 0 ( , 缓冲液使用前用 ( 0 . ’
    ! ) 滤膜过滤, 并用超声波脱气。
    " 0 ! 0 "
    进样条件
    ’ B > (
    = + " 5 B > (C , 分析电压 : (9 D , 检测
    波长 : ( (E ) , 参比波长 . ’ (E ) , 毛细管温度 # ’ F 。
    " 0 "
    溶液制备
    " 0 " 0 !
    供试品溶液 精密称样品粉末 ( - :4 , 加入甲醇 > (
    ) < , 冷浸一夜, 超声提取 ( 0 ’G , #( ( (H
    · ) 3 E
    = > 离心 > () 3 E ,
    移取上清液, 残渣加入甲醇 > () < , 重复超声提取, 合并上清
    液, 低温浓缩, 加入甲醇定容至 :) < , 摇匀, 通过 ( 0 . ’ ! ) 滤
    膜过滤, 并用超声波脱气后直接进样。
    " 0 " 0 "
    对照品溶液 精密称取芍药苷 ( I )
    : ( ( 0 () 4 , ! 1 儿
    茶素 ( J )
    : / 0 K) 4 , 苯甲酸 ( % ) > ( 0 +) 4
    , 没食子酸 ( $ )
    > K 0 /
    ) 4
    , 分别置于 > () < 量瓶中, 用甲醇溶解并定容至刻度, 摇
    匀, 作为对照品溶液。
    " 0 #
    线性范围
    分别精密吸取一定量的对照品溶液 I ,
    J , % , $ , 用甲醇
    稀释成 / 个不同浓度的混合对照品溶液。每个浓度测定 .
    次。以峰面积对浓度 (
    ) 4
    · ) < = > ) 进行线性回归分析, 见表
    > 。
    表 ! 芍药苷、
    ! 1 儿茶素、 苯甲酸及没食子酸的定量回归方
    程、 相关系数和线性范围 0
    & L /
    $ % &! M N 4 H N C C 3 O NN P 8 5 Q 3 ; E C , H N 7 5 Q 3 O N- ; N R R 3 - 3 N E Q5 E S7 3 E N 5 H
    H 5 E 4 N C ; R A 5 N ; E 3 R 7 ; H 3 E , ! 1 - 5 Q N - G 3 E , T N E U ; 3 - 5 - 3 S 5 E S4 5 7 7 3 - 5 - 3 S 0 &
    L /
    化学成分 回归方程 相关系数 线性范围 /
    ) 4
    · ) < = >
    芍药苷
    . L > K . - K / V > ’ - . ( 0 W W W+ > 0 ( ( " > ( 0 ( (
    ! 1 儿茶素 . L >K . ( - . / = > : - ( ( 0 W W W’ ’ 0 # ’ B > ( = : " > 0 ( +
    苯甲酸
    . L >K : ’ - # / V ’ - K ( 0 W W K> > 0 ( + B > ( = : " ( 0 ’ >
    没食子酸
    . L ># K + - ( / V / - + ( 0 W W W> W 0 # ( B > ( = # " ( 0 W #
    " 0 ’
    精密度
    将同一浓度的混合对照品溶液在相同的测定条件下重
    复进样 / 次,
    . 个对照品的 M 2 $ 值分别为: 芍药苷 : 0 : . ? ,
    ! 1 儿茶素 > 0 ’ . ? , 苯甲酸 > 0 # : ? , 没食子酸 # 0 + ’ ? 。
    " 0 (
    重复性
    精密称取同一样品粉末 . 份, 按照 “ : 0 : 0 > ” 项下的方法
    制备供试液,
    . 个待测成分的峰面积的 M 2 $ 值分别为: 芍药
    苷 . 0 # K ? , ! 1 儿茶素 # 0 ( > ? , 苯甲酸 # 0 W : ? , 没食子酸
    + 0 : . ? 。
    " 0 )
    加样回收率
    取已知含量的样品粉末 # 份, 各 ( 0 >4 , 分别精密加入不
    同量的 . 种对照品, 按照 “ : 0 : 0 > ” 项下的方法制备供试液, 分
    别测定并计算 . 个对照品在不同浓度下的加样回收率及
    M 2 $ 值, 见表 : 。
    表 " 芍药苷、
    ! 1 儿茶素、 苯甲酸及没食子酸的加样回收率
    结果 0
    & L #
    $ % &" M N - ; O N H 3 N C; RQ G N5 C C 5 XR ; HA 5 N ; E 3 R 7 ; H 3 E , ! 1 - 5 Q N - G 3 E ,
    T N E U ; 3 - 5 - 3 S5 E S4 5 7 7 3 - 5 - 3 S 0 & L #
    化学成分 水平 测定量 /
    ) 4
    加入量 /
    ) 4
    回收率 / ?
    M 2 $ / ?
    芍药苷
    > ( 0 W # .W > 0 ( ( .( W # 0 > > / 0 > W
    : : 0 ( / >: : 0 ( : (( > ( : 0 ( . ’ 0 + #
    # # 0 ( / +( # 0 ( > (( > ( > 0 K W / 0 ( +
    ! 1 儿茶素 > ( 0 > > #: ( 0 > ( +> > ( ’ 0 + : . 0 # :
    : ( 0 : > ’K ( 0 : > (’ > ( : 0 . W # 0 > /
    # ( 0 # # (> ( 0 # ( .> > ( K 0 ’ . : 0 W W
    苯甲酸
    > ( 0 > ( (+ ( 0 > ( +> W # 0 W K : 0 . >
    : ( 0 > W #. ( 0 : > (’ W > 0 K / # 0 K /
    # ( 0 : W /# ( 0 # ( .> W + 0 . ’ : 0 ’ W
    没食子酸
    > ( 0 ( W .. ( 0 ( W #: > ( > 0 : ’ . 0 + (
    : ( 0 > . .( ( 0 > . KK W / 0 + . / 0 + ’
    # ( 0 : # K# ( 0 : : #: > ( / 0 + K + 0 : #
    " 0 *
    样品中芍药苷、
    ! 1 儿茶素、 苯甲酸、 没食子酸峰指认与
    峰纯度检测
    在以往的色谱研究中, 一般依据保留时间采用加入标准
    物质增高法来指认分析对象的峰位置。这种方法在两种物
    质迁移时间一样的情况下可能出现误差。本实验采用二极
    管阵列检测器 ( $ I $ ) , 可以记录每个峰在全波长 ( > W ("/ ( (
    E ) ) 范围内的吸收光谱图。因此我们应用迁移时间和 $ I $
    紫外光谱图这两个指标来确保样品测定中指认峰的可靠性。
    当两者均与对照品相符时, 才判断为所需的分析对象。
    另外, 我们还对样品谱图上的指认色谱峰做了峰纯度检
    验,
    . 种化合物的峰纯度因子分别为: W W K 0 / + , W W + 0 K > ,
    W W W 0 / W , W + + 0 ’ ’ 。说明本实验采用的缓冲体系可以对样品中
    芍药苷、
    ! 1 儿茶素、 苯甲酸、 没食子酸进行完全的分离。
    " 0 +
    样品测定
    按照 “ : 0 : 0 > ” 项下制备不同产地的野生和栽培芍药根供
    试液, 每个样品溶液测量 # 次, 将各组份的平均峰面积分别
    代入线性回归方程, 计算含量。
    #
    结 果
    不同产地芍药样品中主要成分的含量见表 # , 其中产地
    为黄龙, 亳州, 缙云, 磐安的芍药苷与不加工相比, 分别下降
    了 . / 0 ’ ? ,
    . > 0 / ? , ’ / 0 . ? , # + 0 # ? 。
    # 0 !
    赤芍与白芍药材的含量差异
    主流商品药材的赤、 白芍虽然来源于同种植物的同一入
    药部位, 但因为生长环境及加工方法的不同, 两者在化学成
    分上存在很大差异。野生的赤芍中含有 ( 0 : / ? 的 ! 1 儿茶
    ·
    ’ ’ /
    · 中国药学杂志 : ( ( # 年 W 月第 # K 卷第 W 期
    0 1 ’ &" 1 # , 23 , 4 5 5 67 $ 8 * $ 2 9 $ , , : % ( - 6 ;< % - =
    万方数据
    表 ! 不同产地赤芍、 白芍样品含量测定结果
    " # $! ! " # $ % # $ &" ’( " ) * " # % # $ &+ # ! " # $ % & " #’ " ( & ) ( " , , % ( $ % -
    ’ . " )- + ’ ’ % . % # $ / . % / &
    编号 芍药产地 (收集时间)
    主要成分含量 / 0
    芍药苷
    * 1 儿茶素
    苯甲酸 没食子酸
    赤芍 (野生, 直接干燥的芍药根)
    2 多伦, 内蒙古 2 3 3 4 , 3 5 6 5 7 24 7 6 2 8 95 7 6 2 7 4: 7 6 7 ; 97
    8 喀喇沁旗, 内蒙古 2 3 3 3 , 3 5 6 2 5 7< 7 6 8 7 :7 7 6 7 5 79 7 6 7 8 :5
    < 克什克腾旗, 内蒙古 2 3 3 4 , 5 3 6 8 < 87 7 6 9 4 :9 7 6 7 ; <5 7 6 7 8 52
    9 克山, 黑龙江 2 3 3 4 , 2 2 2 7 6 < 2 5< 7 6 2 : 73 7 6 2 7 <4
    未测出
    ; 黑河, 黑龙江 2 3 3 3 , 3 : 6 9 2 <: 7 6 : 7 24 7 6 7 < <2
    未测出
    : 桦南, 黑龙江 2 3 3 4 , 4 : 6 : 5 59 7 6 8 8 <: 7 6 2 2 7;
    未测出
    5 白城, 吉林 2 3 3 3 , 2 7 5 6 7 3 ;8 7 6 ; 8 59 7 6 7 : 27
    未测出
    4 西丰, 辽宁 2 3 3 4 , 4 5 6 ; ; 7: 7 6 7 ; 2; 7 6 8 2 78 7 6 7 8 28
    3 隆化, 河北 2 3 3 3 , 3 4 6 5 8 47 7 6 2 < <7 7 6 7 < 32
    未测出
    2 7 围场, 河北 8 7 7 7 , 3 : 6 5 7 45 7 6 8 < 98 7 6 7 9 43 7 6 7 9 7<
    2 2 崇礼, 河北 2 3 3 4 , 2 7 : 6 : 9 5: 7 6 7 : 79 7 6 7 5 <2
    未测出
    2 8 怀来, 河北 8 7 7 7 , 3 5 6 : ; 73 7 6 9 < <5 7 6 7 2 :5
    未测出
    2 < 黄龙, 陕西 2 3 3 4 , 2 2 5 6 2 ; 9; 7 6 2 : 75 7 6 7 9 ;: 7 6 2 8 4<
    生白芍或 “赤芍” (栽培, 直接干燥的芍药根)
    2 9 亳州, 安徽 8 7 7 7 , 3 < 6 2 9 94
    未测出
    7 6 7 4 9: 7 6 7 5 ;8
    2 ; 缙云, 浙江 8 7 7 7 , 4 < 6 3 5 84
    未测出
    7 6 2 2 44 7 6 7 5 :3
    2 : 磐安, 浙江 8 7 7 7 , ; : 6 7 2 :;
    未测出
    7 6 2 ; ;; 7 6 7 3 53
    白芍 (栽培, 去皮水煮的芍药根)
    2 5 黄龙, 陕西 2 3 3 4 , 3 < 6 4 < 2 8
    未测出
    7 6 7 5 8; 7 6 7 : 32
    2 4 亳州, 安徽 8 7 7 7 , 3 2 6 4 < 59
    未测出
    7 6 7 2 2:
    2 ) 7 6 7 ; :9
    2 3 缙云, 浙江 8 7 7 7 , 4 2 6 5 < 74
    未测出
    7 6 7 7 37
    2 ) 7 6 7 5 73
    8 7 磐安, 浙江 8 7 7 7 , 5 < 6 5 5 9;
    未测出
    7 6 7 8 ;3 7 6 7 5 ;<
    注:
    2 ) 超出校准范围
    = " $ % :
    2 )
    " > $ " ’ ( / , + ? . / $ + " # . / # @ %
    精,
    5 6 : 8 0 的芍药苷, 7 6 7 5 ; 0 的苯甲酸, 以及 7 6 7 8 < 0 的没食
    子酸。同样条件下, 由栽培芍药根加工成的白芍中未检测到
    儿茶精, 芍药苷含量为 8 6 5 3 0 , 没食子酸含量为 7 6 7 : 4 0 , 苯
    甲酸仅有 7 6 7 8 3 0 。上述 9 个成分在赤、 白芍中不仅含量差
    别大, 而且比例关系也不同。以苯甲酸为基准, 赤芍中芍药
    苷的含量是苯甲酸的 2 9 5 6 9 : 倍, 儿茶精是它的 : 6 < < 倍, 没
    食子酸只为其 7 6 < 4 倍。而白芍中芍药苷的含量是苯甲酸的
    2 7 3 倍, 没食子酸却是它的 < 6 7 4 倍。
    ! 6 %
    野生与栽培芍药根的含量差异
    在本实验条件下, 测得的野生来源的芍药根中芍药苷的
    含量大于 : 6 9 0 ,
    * 1 儿茶精的含量高于 7 6 7 ; 0 , 没食子酸的
    含量 (除黄龙外) 小于 7 6 7 ; 0 , 苯甲酸含量低于 7 6 8 2 0 。与
    之不同, 药用栽培来源的芍药根中没有检测到 * 1 儿茶精, 芍
    药苷的含量小于 : 6 7 0 , 没食子酸的含量大于 7 6 7 5 0 , 苯甲
    酸含量低于 7 6 2 ; 0 。芍药野生品的醇提部分化学成分丰富,
    总含量高。而药用栽培品的化学成分单一, 总含量低。因
    此, 野生状态下生长的芍药根与大规模药用种植条件下生长
    的芍药根有明显差异, 若以后者充 “赤芍” 用, 恐难达疗效。
    ! 6 !
    不同产地赤芍药材的含量差异
    野生来源的赤芍中, 单从芍药苷看, 黑龙江克山所产含
    量最高 ( 2 7 6 < 0 ) 。但从没食子酸和 * 1 儿茶精的组成配比
    看, 内蒙古多伦、 喀喇沁旗、 克什克腾旗等地所产的赤芍中两
    个成分的含量均较高。相比之下, 大、 小兴安岭一带 (黑河、
    克山、 桦南) 所产赤芍中均未检测到没食子酸。辽宁西丰产
    的赤芍中 * 1 儿茶精的含量最低 ( 7 6 7 ; 0 ) 。所以依据多组分
    评价体系可以看出, 传统道地药材 “多伦赤芍” 与大、 小兴安
    岭主产的赤芍在化学成分上存在一定差异。
    ! 6 &
    加工前后及不同产地白芍药材的含量差异
    对比同一产地栽培芍药根加工前后的化学成分变化发
    现, 去皮水煮后, 芍药苷的含量下降了 < 5 0! ; : 0 , 没食子酸
    含量只下降了 4 0! 8 ; 0 , 苯甲酸的变化最大, 下降达 4 < 6 < 0
    ! 3 8 6 9 0 。因此, 经过产地加工处理, 苯甲酸几乎消失, 芍药
    苷与苯甲酸的含量比从 < : 倍上升到 2 : ; 倍, 没食子酸与苯
    甲酸的含量比也由 7 6 5 8 倍上升到 5 6 8 ; 倍。从组分配比还
    可以看出, 不同产地、 特别是道地与非道地的白芍药材之间,
    化学成分有所不同。在道地产区, 芍药苷含量是苯甲酸的
    2 : ; 倍, 没食子酸含量是苯甲酸的 ; 6 8 8 倍; 在非道地产区, 前
    者只有 ; 8 6 4 9 倍, 后者仅为 7 6 3 ; 倍。
    &
    讨 论
    & 6 ’
    如何为同一来源 (芍药) , 而功效大不相同的中药赤芍
    (野生芍药居群) 和白芍 (栽培芍药群体) 制定切实可行的质
    量标准是亟待解决的问题。本研究发现栽培群体未检出具
    有活血化淤作用的成分 * 1 儿茶精, 部分地解释赤、 白芍药性
    的区别, 建议将 * 1 儿茶精列为芍药来源的赤芍的鉴别检项。
    & 6 %
    在中国药典中, 芍药苷是区分同一物种来源的赤芍和
    白芍药材的唯一定量指标。 2 3 3 7 年版和 2 3 3 ; 年版药典中采
    用薄层色谱法, 只规定了赤芍含芍药苷不得少于 8 6 7 0 , 而对
    白芍则未规定芍药苷的含量
    [ 2 7 ! 2 2 ]
    。 8 7 7 7 年版药典采用高
    效液相色谱法, 规定芍药苷的含量在赤芍中不得低于 2 6 4 0 ,
    在白芍中不得少于 7 6 4 0
    [ 2 ]
    。然而, 从本实验获得的大范围、
    多产地代表样品的测定数据来看, 赤、 白芍中芍药苷的含量
    普遍比药典规定的高, 如果以芍药苷含量 9 0 为界, 可以对二
    药加以区分。虽然由于检测手段、 采收时节、 加工方法的不
    同, 赤、 白芍药材中芍药苷含量的测量值不尽相同, 但大多数
    的文献记载与本实验的结果趋势一致。比较不同作者对不
    同生长期、 不同规格的杭白芍、 亳白芍和川白芍中芍药苷的
    含量测定结果, 如用薄层色谱法均小于 2 6 ; 0
    [ 2 8 ! 2 9 ]
    ; 如用高
    效液相色谱法不超过 9 0
    [ 2 ; ! 2 5 ]
    。而用高效液相色谱法在完
    全相同的条件下测得的野生赤芍中芍药苷的含量大多为 ; 0
    ! 5 0
    [ 2 ; ! 2 : ]
    。由此看来, 现行药典标准存在两个问题: " 芍
    药苷的药理活性主要表现在活血化淤、 解痉止痛方面, 与赤
    芍的功效相吻合。而药典中赤芍的芍药苷含量标准偏低, 难
    以发挥质量控制的作用。 # 白芍的主要功效是补血滋阴, 与
    赤芍有所不同。而药典中白芍的芍药苷含量只有下限, 没有
    上限, 就会与赤芍的含量标准相重叠, 难以体现赤芍和白芍
    的临床疗效差异。因此, 建议适当提高赤芍的芍药苷含量标
    准, 同时将白芍中芍药苷的含量控制在一定范围。
    上一条:白鲜皮的分布和概况 下一条:芍药休眠芽发育进程内源激素变化研究